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胎鼠皮層神經(jīng)元的原代培養(yǎng)

更新時間:2021-11-16      點擊次數(shù):987

一、背景
大腦皮層是調(diào)節(jié)軀體運動的高級
中樞。它由初級感覺區(qū)、初級運動區(qū)和聯(lián)合區(qū)三部分構(gòu)成。人類大腦皮層的神經(jīng)細(xì)胞約有140億個,面積約2200平方厘米,主要含有錐體形細(xì)胞、梭形細(xì)胞和星形細(xì)胞(顆粒細(xì)胞)及神經(jīng)纖維。

體外原代培養(yǎng)神經(jīng)元作為神經(jīng)科學(xué)研究的有力手段,越來越受到廣大科研工作者的重視。由于神經(jīng)元是一種高度分化的細(xì)胞,動物出生后很少分裂,相對于其它細(xì)胞而言,神經(jīng)元在體外更難以存活和生長。因此,體外培養(yǎng)神經(jīng)元要求的培養(yǎng)方法和營養(yǎng)條件均較為特殊。

二、實驗步驟
1. 無菌條件下,從懷孕18天的SD 大鼠腹中取出胚胎放入預(yù)冷的無鈣、鎂平衡鹽溶液中;
2.在解剖顯微鏡下,分離取出胚胎大腦皮層,除去腦膜,剪碎組織(1mm3),加入0.125%胰酶-EDTA 消化液后放入 37℃孵箱內(nèi)消化10 分鐘,期間搖晃一次;
3.去掉上清,加入終止液終止消化,吹打10-15次,不能有氣泡,收集上清;剩余沉淀加入終止液繼續(xù)吹打5-10次;
4.所收集的上清過濾后,將細(xì)胞懸液于4℃1000rpm離心10min ,棄上清,管內(nèi)加入新鮮培養(yǎng)液重懸;
5.臺盼藍(lán)染色計數(shù),以 3 x 104cells/孔種入包被的24孔板,37℃,5%CO2,95%飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6.每周換液兩次,每次半量換液。

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