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新生小鼠原代心肌成纖維細(xì)胞的分離與培養(yǎng)

更新時(shí)間:2024-03-28      點(diǎn)擊次數(shù):686

1. 準(zhǔn)備0-1天內(nèi)的C57BL/6J鼠新生鼠。

2. 用溫的無菌去離子水,輕輕擦拭每只新生鼠。

3. 70%的乙醇去除新生鼠身體上的污染物。

4. 斷頭,取心臟,心臟置于冰的PBSG溶液中。

5. 除去血液和非心臟組織。

6. 剪碎心臟組織。

7. 加入胰酶-膠原酶消化液,每只新生鼠75ul。

8. 37°C的搖床培養(yǎng)箱中,以250 rpm/ 5 min,消化心肌組織。

9. 輕輕渦旋,然后離心10秒,丟棄第一次消化的上清液。

10. 開始第二次消化,250 rpm/ 5 min,輕輕渦旋,然后離心10秒,收集上清液到2倍體積的胎牛血清中。

11. 重復(fù)上述消化過程,共進(jìn)行8次消化,收集細(xì)胞懸液。

12. 使用沒有包被的10cm大皿,預(yù)種植細(xì)胞1h

13. 1小時(shí)后,將培養(yǎng)皿從培養(yǎng)箱中取出,移除沒貼壁的細(xì)胞上清液,加入完丨全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。


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